超声波细胞破碎仪使用过程中遇到的问题

　　1.100g大肠杆菌溶于1L破碎液里（破碎掖：50mMTris-Cl（PH8.5）5mMEDTA0.14MNaCl），搅拌，发现菌液发粘，菌体不能够很好分散，用高压匀质机破碎，加压后，菌液不能进入匀质机，速度很慢，请问是何原因？　　
　　能有好的办法解决，很好用匀质机快速破碎菌体？解析：将破碎液的量加大，不能很好分散可能是量太大；超声处理5－10分钟，菌液粘度即可大大降低，也可促进菌体分散。　　
　　2.怎样合理选择超声波破碎仪参数（条件）？　　
　　解析：不同型号的设备功率不一样，功率的大小决定了使用变幅杆的大小范围（直径2mm至几十毫米），你使用多大的变幅杆就在设备的上调至该刻度（很简单的）！变幅杆的大小决定了处理量。一般情况，5ml以下选3mm，5～50ml可选6～8mm，50ml以上选10mm以上的变幅杆！占空比不用关心，主要是指超声时间和停顿时间的比值。　　
　　3.为什么用塑料大试管,玻璃的不可以吗？
　　解析：不可以的，如果使用玻璃管，可能会碎裂，而通常使用的是塑料试管。超声波是物质介质中的一种弹性机械波，它既是一种波动形式,又是一种能量形式。超声波破碎仪对细胞的作用主要有热效应，空化效应和机械效应。热效应是当超声在介质中传播时，摩擦力阻碍了由超声引起的分子震动，使部分能量转化为局部高热（42－43℃）。空化效应是在超声照射下，生物体内形成空泡，随着空泡震动和其猛烈的聚爆而产生出机械剪切压力和动荡。另外，空化泡破裂时产生瞬时高温（约5000℃）、高压（可达500×104Pa），可使水蒸气热解离产生.OH自由基和.H原子，由.OH自由基和.H原子引起的氧化还原反应可导致多聚物降解、酶失活、脂质过氧化和细胞杀伤。机械效应是超声的原发效应，超声波在传播过程中介质质点交替地压缩与伸张构成了压力变化，引起细胞结构损伤。损伤作用的强弱与超声的频率和强度密切相关。　　
　　4.从细胞中提取酶，超声波破碎仪破碎时间长会影响到酶的活性，怎么办？　　
　　解析：如果需要的是胞内酶，细胞破碎程度和需要的酶获得之间基本上有正比关系。破碎时间长的确会影响到酶的活性。这就需要在最佳的破碎时间和酶活性之间做出判断，最直接的办法是先绘制相关曲线（酶活性和时间的关系曲线）。如果实验中超声波破碎仪破碎的是棒状杆菌（也是很难破壁的G+菌），破碎时间控制在30min左右，酶活较好。如果是基质菌丝的话,好可以考虑用溶菌酶处理一下。